Chromatograf NeoCHROM-STEROIDS
Steroidomika metodą chromatografii gazowej sprzężonej ze spektrometrią mas (GC-MS)
NeoCHROM-STEROIDS — system chromatografii gazowej o potwierdzonym statusie wyrobu medycznego do diagnostyki in vitro (IVD). Rozwiązanie służy do badania profilu steroidowego próbek biologicznych i może być wyposażone w detektor spektrometrii mas lub detektor płomieniowo-jonizacyjny. Skład panelu, rodzaj próbki i procedurę przygotowania próbek dobiera się do zadania analitycznego i potwierdza podczas walidacji.
Profil steroidowy dostarcza laboratorium więcej informacji niż wynik oznaczenia pojedynczego hormonu. Jednoczesne badanie hormonów, ich prekursorów i metabolitów pomaga prześledzić powiązania między szlakami steroidogenezy i uzyskać dane do kompleksowej interpretacji klinicznej.
Analiza jakościowa i ilościowa metodą GC-MS
Nowoczesne rozwiązania do szczegółowego profilowania steroidów wykorzystują chromatografię gazową z detekcją metodą spektrometrii mas. GC-MS rozdziela związki o podobnej budowie, pomaga identyfikować je na podstawie czasu retencji i widma mas oraz oznaczać stężenia z wykorzystaniem kalibracji. Jest to szczególnie ważne dla izomerów steroidowych, które trudno rozróżnić wyłącznie na podstawie piku chromatograficznego.
Oprócz stężeń poszczególnych analitów metoda może obejmować obliczanie stosunków między metabolitami. Pomagają one oceniać zmiany w poszczególnych szlakach steroidogenezy. Do metod ukierunkowanych system może być również wyposażony w detektor płomieniowo-jonizacyjny (FID).
Profil steroidowy moczu
Perspektywicznym kierunkiem analizy moczu jest rozszerzony panel metabolitów steroidów. Opublikowane metody GC-MS wykazują możliwość jednoczesnego oznaczania 32 związków z pięciu grup:
- Progestageny i ich metabolity: 17-hydroksypregnanolon, pregnanediol, pregnenetriol, pregnanetriolon, pregnanetriol.
- Szlak mineralokortykoidowy: tetrahydro-11-deoksykortykosteron, 5α-tetrahydrokortykosteron, tetrahydrokortykosteron, tetrahydro-11-dehydrokortykosteron.
- Glikokortykoidy i ich metabolity: 11-ketoetiocholanolon, 11β-hydroksyetiocholanolon, tetrahydro-11-deoksykortyzol, tetrahydrokortyzon, tetrahydrokortyzol, 5α-tetrahydrokortyzol, β-kortol, α-kortolon, β-kortolon, α-kortol, kortyzol, 20α-dihydrokortyzol.
- Androgeny i ich metabolity: 5α-androstanediol, androsteron, Δ5-androstenediol, etiocholanolon, dehydroepiandrosteron (DHEA), 11β-hydroksyandrosteron, 16α-hydroksy-DHEA, androstenetriol.
- Estrogeny: estron, estriol, 17β-estradiol.
Przedstawiony wykaz stanowi podstawę do opracowania panelu. Ostateczny zestaw analitów i ich granice oznaczalności są potwierdzane dla metody NeoCHROM-STEROIDS podczas walidacji.
Profil steroidowy surowicy krwi
Badanie surowicy stawia inne zadanie analityczne: oznaczanie hormonów krążących, ich prekursorów i produktów przemian. Możliwości GC-MS z pojedynczym kwadrupolem wykazano na przykładzie metody obejmującej 54 związki docelowe: 26 androgenów, 9 estrogenów, 5 progestagenów, 6 kortykoidów i 8 steroli.
Do analitów, na podstawie których można opracować panel dla surowicy, należą:
- Androgeny i ich metabolity: testosteron, epitestosteron, androstendion, dehydroepiandrosteron (DHEA), androsteron, etiocholanolon, 6β-hydroksyandrostendion, 11β-hydroksyandrostendion, 16α-hydroksyandrostendion i 16α-hydroksy-DHEA.
- Estrogeny i ich metabolity: estron, 17β-estradiol, estriol oraz 2- i 4-hydroksypochodne estronu i estradiolu.
- Progestageny i prekursory: pregnenolon, progesteron, 17α-hydroksypregnenolon, 17α-hydroksyprogesteron i 21-hydroksypregnenolon.
- Kortykoidy i ich metabolity: kortyzol, kortyzon, 11-deoksykortyzol, 6β-hydroksykortyzol i 6β-hydroksykortyzon.
- Sterole: cholesterol, 7α-hydroksycholesterol, 7β-hydroksycholesterol, 4β-hydroksycholesterol, 20α-hydroksycholesterol, 24S-hydroksycholesterol i 27-hydroksycholesterol.
Są to przykłady związków z szerokiego panelu, a nie deklaracja, że oznaczanie wszystkich 54 składników zostało już zwalidowane na NeoCHROM-STEROIDS. Skład panelu i parametry analityczne sprawdza się oddzielnie dla surowicy i osocza.
Przygotowanie próbek dostosowane do ich rodzaju
Metoda dla moczu może obejmować ekstrakcję, hydrolizę sprzężonych steroidów, ponowne oczyszczanie i derywatyzację przed analizą GC-MS. Surowica i osocze wymagają odrębnego podejścia: izolacji związków docelowych, usunięcia składników matrycy i derywatyzacji. Hydrolizę stosuje się wtedy, gdy zadanie obejmuje oznaczanie form sprzężonych.
Sekwencję przygotowania próbek dobiera się wraz z wykazem analitów. Podczas walidacji sprawdza się selektywność, odtwarzalność i granice oznaczalności dla wybranego rodzaju próbki.
Czas analizy i przepustowość
Cykl chromatograficzny trwa 45–90 minut w zależności od metody i składu panelu. Odpowiada to około 5–10 iniekcjom w ciągu 8 godzin lub 16–32 iniekcjom na dobę na jednym kanale analitycznym, bez uwzględnienia przerw. Rzeczywistą liczbę wyników planuje się z uwzględnieniem przygotowania próbek, kalibracji, próbek ślepych i próbek kontrolnych.
Powiedz nam, jakie anality i próbki biologiczne zamierza badać Twoje laboratorium. Zaproponujemy skład panelu, konfigurację systemu i metodę do sprawdzenia pod kątem Twojego zadania analitycznego.
Dobierz chromatograf
Opisz rodzaj próbek, składniki, oczekiwane stężenia i metodę normatywną. Inżynierowie NeoChrom zaproponują konfigurację urządzenia do konkretnego zadania analitycznego.